彗星試驗(yàn)的原理是怎樣的？

　　彗星實(shí)驗(yàn)也稱單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn),是一種有效評估DNA損傷的方法。其原理是器官或組織經(jīng)處理（如輻射、重金屬等）后，細(xì)胞中的DNA發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂，經(jīng)細(xì)胞及其核膜裂解后，DNA解旋，在電場作用下，DNA斷片遷移出細(xì)胞核，形成彗星狀的電泳圖譜。正常細(xì)胞的大分子DNA在電場作用下遷移距離較短，DNA仍保留在細(xì)胞核的范圍，形成圓形或輕微拖尾的圖譜。根據(jù)電泳緩沖液的pH值不同，可分為中性彗星實(shí)驗(yàn)（pH=8.4）和堿性彗星實(shí)驗(yàn)（pH＞13）。中性彗星實(shí)驗(yàn)主要用于檢測DNA雙鏈的斷裂損傷，堿性彗星實(shí)驗(yàn)具有更高的靈敏性，可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷。

 

　　需要注意的是，試驗(yàn)過程中的個(gè)方面，包括樣品準(zhǔn)備、電泳條件、視覺分析參數(shù)(如染色強(qiáng)度、顯微鏡光強(qiáng)度以及使用顯微鏡濾鏡和相機(jī)動(dòng)態(tài)和環(huán)境條件(如背景照明)已經(jīng)被研究，可能影響DNA遷移。

　　每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)證明能夠?yàn)樗褂玫哪繕?biāo)組織獲得足夠質(zhì)量的單細(xì)胞或細(xì)胞懸浮液，從而在彗星試驗(yàn)（cometassay）中建立實(shí)驗(yàn)?zāi)芰ΑR智泰康擁有多年毒理學(xué)服務(wù)與產(chǎn)品研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，針對不同遺傳毒性試驗(yàn)開發(fā)針對試劑盒，包括彗星試驗(yàn)試劑盒。首先通過%尾DNA的評價(jià)，對照處理組動(dòng)物%尾DNA在低范圍內(nèi)。目前的數(shù)據(jù)表明,尾部DNA百分比(基于平均中位數(shù))在大鼠肝臟應(yīng)該最好不要超過6%,這將是符合JaCVAM驗(yàn)證試驗(yàn)的值和其他出版和私有數(shù)據(jù)。目前還沒有足夠的數(shù)據(jù)對其他組織的最佳或可接受范圍提出建議。這并不排除合理使用其他組織。測試報(bào)告應(yīng)根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)或?qū)Ｓ袛?shù)據(jù)，對彗星試驗(yàn)在這些組織中的性能進(jìn)行適當(dāng)?shù)膶彶椤Ｊ紫龋趯φ战M中，需要一個(gè)較低的%尾DNA范圍，以提供足夠的動(dòng)態(tài)范圍來檢測陽性的影響。其次，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)能夠按照不同方式，對直接誘變劑和促進(jìn)劑的反應(yīng)。